走进尊龙凯时

NEWS

尊龙凯时蛋白质含量定量实验说明

来源:濮阳媚瑾 日期:2025-03-25

尊龙凯时实验概要:采用LOWRY法测定蛋白质含量。本实验结合了双缩脲法和福林酚法,其基本原理是在碱性铜溶液中处理蛋白质溶液,形成铜-蛋白质络合盐。加入酚试剂后,肽链中诸如酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等成分显色。同时,双缩脲法中肽键与碱性铜的显色效果也被增强,使该方法比单独使用酚试剂的显色强度提高了3至15倍,相较于双缩脲法提高了100倍。因此,该方法在不同蛋白质种类间的偏差也减少了。

尊龙凯时蛋白质含量定量实验说明

LOWRY法试剂分为两部分:试剂甲为碱性铜溶液,能与蛋白质中的肽键发生显色反应;试剂乙为磷钨酸与磷钼酸的混合液,在碱性条件下不稳定,容易被酚类还原为蓝色反应,具有显色效果。显色的深浅与蛋白质含量呈正比。

尊龙凯时实验所用主要试剂包括:Na2WO4•2H2O,Na2MoO4•2H2O,H3PO4,HCl,Li2SO4•H2O,溴水,酚酞指示剂,Na2CO3,NaOH,CuSO4•5H2O,酒石酸钾钠,牛血清白蛋白(配制成250 mg/ml)。所需设备主要包括试管、定量吸管、圆底烧瓶、冷凝管、微量滴定管等。

实验步骤如下:第一,制备酚试剂。将Na2WO4、Na2MoO4及蒸馏水混合,之后加入磷酸和浓盐酸,回流蒸煮10小时,随后添加Li2SO4和浓盐酸,再次回流煮沸。冷却后稀释并过滤。使用时,通过NaOH标准溶液滴定,计算酸浓度,最终配成Folin-酚试剂乙液。

接下来绘制标准曲线,通过不同浓度的标准蛋白质溶液制备并加入酚试剂,混合后在特定条件下显色并测定吸光度。使用吸光度值与蛋白质浓度绘制标准曲线。样品测定则取样液,加入水稀释后重复上述步骤,空白样作参比测量吸光度值,并根据标准曲线计算蛋白质含量。

注意事项包括:Folin试剂乙在酸性条件下稳定,必须迅速混合以避免还原反应;在25至30℃条件下反应30分钟后计时比色。此外,实验中还需考虑干扰因素,如有其他还原物质可能对结果产生影响。

尊龙凯时提供的LOWRY法和考马斯亮蓝法均为高灵敏度的蛋白质定量方法,前者便捷,后者则相对稳定。二者各有优缺点,包括LOWRY法受到植物内部酚类物质的影响,而考马斯亮蓝法在高蛋白浓度下线性关系稍有偏差。

上一篇:尊龙凯时生物医疗领域凯风学术支持计划首期评选结果公布下一篇:医用冰箱与尊龙凯时家用冰箱的区别

全国客户服务热线
17017064471 总部地址:北京浔阳区巩街道10号

欢迎关注尊龙凯时官方微信或拨打客服电话详询!

  

尊龙凯时官方微信